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液相色譜儀操作注意事項

點擊次數(shù):6856 更新時間:2009-10-22

流動相:
1、 流動相應(yīng)選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水,酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后使用,過濾時注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍;
2、 水相流動相需經(jīng)常更換(一般不超過2天),防止長菌變質(zhì);
3、 使用雙泵時,A、B、C、D四相中,若所用流動相中有含鹽流動相,則A、D(進液口位于混合器下方)放置含鹽流動相,B、C(進液口位于混合器上方)放置不含鹽流動相;
A、B、C、D四個儲液器中其中一個為棕色瓶,用于存放水相流動相。
樣品:
1、 采用過濾或離心方法處理樣品,確保樣品中不含固體顆粒;
2、 用流動相或比流動相弱(若為反相柱,則極性比流動相大;若為正相柱,則極性比流動相小)的溶劑制備樣品溶液,盡量用流動相制備樣品液;
3.手動進樣時,進樣量盡量小,使用定量管定量時,進樣體積應(yīng)為定量管的3~5倍;
色譜柱:
1、 使用前仔細閱讀色譜柱附帶的說明書,注意適用范圍,如pH值范圍、流動相類型等;
2、 使用符合要求的流動相;
3、 使用保護柱;
4、 如所用流動相為含鹽流動相,反相色譜柱使用后,先用水或低濃度甲醇水(如5%甲醇水溶液),再用甲醇沖洗。
5、 色譜柱在不使用時,應(yīng)用甲醇沖洗,取下后緊密封閉兩端保存;
6、 不要高壓沖洗柱子;
7、 不要在高溫下長時間使用硅膠鍵合相色譜柱;
使用過程中注意輕拿輕放。操作過程:
1、 開機操作:
(1)、打開電源,用Harb相連接時,注意Harb電源,打開計算機,打開Bootp Server(一般啟動時已打開);
(2)、自上而下打開個組件電源,Bootp Server里顯示有信號時(有六行字符),打開工作站(先打開On line);
(3)、打開沖洗泵頭的10%異丙醇溶液的開關(guān)(需用針捅抽),控制流量大小,以能流出的zui小流量為準;
(4)、注意各流動相所剩溶液的容積設(shè)定,若設(shè)定的容積低于zui低限會自動停泵,注意洗泵溶液的體積,及時加液;
(5)、使用過程中要經(jīng)常觀察儀器工作狀態(tài),及時正確處理各種突發(fā)事件。
2、 先以所用流動相沖洗系統(tǒng)一定時間(如所用流動相為含鹽流動相,必須先用水沖洗20分鐘以上再換上含鹽流動相),正式進樣分析前30min 左右開啟D燈或W燈,以延長燈的使用壽命;
3、 建立色譜操作方法,注意保存為自己命名的Method,勿覆蓋或刪除他人的方法及實驗結(jié)果;
4、 使用手動進樣器進樣時,在進樣前和進樣后都需用洗針液洗凈進樣針筒,洗針液一般選擇與樣品液一致的溶劑,進樣前必須用樣品液清洗進樣針筒3遍以上,并排除針筒中的氣泡;
5、 溶劑瓶中的沙芯過濾頭容易破碎,在更換流動相時注意保護,當發(fā)現(xiàn)過濾頭變臟或長菌時,不可用超聲洗滌,可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌;
6、 實驗結(jié)束后,一般先用水或低濃度甲醇水溶液沖洗整個管路30分鐘以上,再用甲醇沖洗。沖洗過程中關(guān)閉D燈、W燈;
7、 關(guān)機時,先關(guān)閉泵、檢測器等,再關(guān)閉工作站,然后關(guān)機,zui后自下而上關(guān)閉色譜儀各組件,關(guān)閉洗泵溶液的開關(guān);
8、 使用者須認真履行儀器使用登記制度,出現(xiàn)問題及時向老師報告,不要擅自拆卸儀器。
 (續(xù))
1、 操作過程若發(fā)現(xiàn)壓力很小,則可能管件連接有漏,注意檢查。當出現(xiàn)錯誤警告(各組件指示燈均為紅色),一般為漏液,其中一個感應(yīng)器中已有溶劑,漏液故障排除后,擦干,點擊On line操作界面中的Instrument/System Off,然后再點擊操作界面中的Instrument/System On即可。
2、 連接柱子與管線時,應(yīng)注意擰緊螺絲的力度,過度用力可導(dǎo)致連接螺絲斷裂。柱接頭處易發(fā)生漏液,可能情況為接頭Fittings中間的管子未和接口處貼緊。不同廠家的管線及色譜柱頭結(jié)構(gòu)有差異,不要混用,必要時可使用PEEK管及活動接頭;
3、 操作過程若發(fā)現(xiàn)壓力非常高,則可能管路已堵,應(yīng)先卸下色譜柱,然后用分段排除法檢查,確定何處堵塞后解決。若是保護柱或色譜柱堵塞,可用小流量流動相或以小流量異丙醇沖洗,還可采用小流量反沖的辦法(新柱不提倡),若還是無法通暢,則需換柱;
4、 運行過程中自動停泵,可能為壓力超過上限或流動相用完;
5、 樣品瓶中樣品較少,自動進樣器進樣針無法到達液面,可采用調(diào)低進樣針進樣高度的辦法,注意設(shè)置時不要使進樣針碰到瓶底,微量樣品分析應(yīng)使用微量樣品瓶;
6、 自動進樣器進樣針未與樣品瓶瓶口對準時,需重新定位。
7、 泵壓不穩(wěn)或流量不準,可能為柱塞桿密封圈問題或seal wash墊圈問題,需更換;
8、 基線產(chǎn)生不規(guī)則噪聲,可能原因為系統(tǒng)不穩(wěn)定或沒達到化學(xué)平衡(使其平衡,若用離子對試劑,在使用使需要足夠的時間和溶劑體積,色譜柱才能達到足夠的平衡),流動相被污染(更換流動相,清洗儲液器、過濾器,沖洗并重新平衡系統(tǒng)),色譜柱被污染(為證明可能的原因更換系統(tǒng)的色譜柱或使用一根同類的被證明性能好的色譜柱),檢測器不穩(wěn)定;
9、 短期有規(guī)則的噪聲,可能原因為泵壓不穩(wěn)或泵脈沖,調(diào)節(jié)溶劑不適當(如兩種溶劑的互溶性問題),泵入口管路松或堵塞,泵太臟,泵柱塞磨損,檢測器不穩(wěn)定;
10、 長期有規(guī)則噪聲,可能原因為室溫不穩(wěn)(未使用柱溫箱)或使用柱溫箱不當;
11、 基線漂移,可能原因為系統(tǒng)不穩(wěn)或沒有達到化學(xué)平衡,室溫不穩(wěn)(未使用柱溫箱),流動相污染或分解,柱污染,檢測池泄漏,系統(tǒng)泄漏,固定相流失(另選流動相,另選色譜柱),測定的波長選擇錯誤(對溶劑有吸收),樣品組分保留太長(用強度合適的溶劑清洗色譜柱),檢測器不穩(wěn)定;
12、 每次進樣時的保留時間不重復(fù),可能原因為系統(tǒng)不穩(wěn)或未達到化學(xué)平衡,由于氣泡、各部件磨損等原因引起的泵壓或泵脈沖輸液不穩(wěn)定,進樣體積太大或樣品濃度太高平衡被破壞,溶劑配比不合適,柱被污染;
13、 無峰,可能原因為檢測器選擇錯誤,使用錯誤的流動相,樣品降解;
14、 色譜峰比預(yù)計的小,可能原因為進樣體積錯誤,檢測器燈故障,進樣問題(瓶號錯、進樣體積不合適、進樣錯誤、針頭堵塞);
15、 峰變寬,可能原因為進樣體積太大或樣品濃度太高,過濾器、保護柱入口、柱入口或連接管路有部分堵塞,檢測器時間常數(shù)設(shè)置錯誤,進樣器問題(如閥漏、針頭堵塞或損壞),柱或保護柱被污染,對流動相來說樣品溶劑太強,使用錯誤的色譜柱,溫度變化;
16、 出現(xiàn)雙峰/肩峰,可能原因為保護柱或柱入口部分阻塞,柱或保護柱被污染,柱性能下降,保護柱失效,進樣體積太大或樣品濃度太高(樣品過載),平衡破壞;
17、 前沿峰,可能原因為進樣體積太大或樣品濃度太高(樣品過載),平衡破壞,對于流動相來說樣品溶劑非極性太強(對于反相柱),柱或保護柱被污染,柱性能下降,保護柱失效;
18、 脫尾峰,可能原因為柱或保護柱被污染,柱性能下降,保護柱失效,進樣器問題(如閥漏等),檢測器時間常數(shù)設(shè)置錯誤;
19、 出現(xiàn)鬼峰,可能原因為流動相被污染,樣品預(yù)處理時產(chǎn)生降解或混入雜質(zhì),先前進樣的流出物,樣品定量管清洗不當,注射器臟,柱被污染,進樣裝置被污染,流動相中含有穩(wěn)定劑/穩(wěn)定劑變化。

 

豫公網(wǎng)安備 41100202000407號

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