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液相色譜儀的日常維護(hù)和故障排除

點(diǎn)擊次數(shù):2844 更新時間:2013-12-21

液相色譜儀的日常維護(hù)和故障排除

 

液相色譜儀的日常維護(hù)和故障排除
 1、日常維護(hù)
1.1 泵
      泵是液相色譜儀的心臟,須精心維護(hù)和保養(yǎng)。處于良好工作狀態(tài)的泵,其基線平穩(wěn),保留時間重現(xiàn)性好,梯度洗脫時壓力變化緩慢而平穩(wěn)。要使泵具備良好的操作性能,應(yīng)該保持泵系統(tǒng)的清潔。具體做法如下:
(1)要選擇的容劑和試劑,在進(jìn)入儀器前用 0。45um 膜過濾,并進(jìn)行脫氣處理。
(2)泵開始使用時,一定要用合適的流動相*清洗干凈。
(3)定期檢查并更換在線過濾片及有關(guān)的墊圈,并經(jīng)常清洗進(jìn)液處的微孔濾頭。
(4)改變流動相時,應(yīng)避免沉淀產(chǎn)生,以防止泵堵塞。
1.2色譜柱 
     色譜柱是化合物分離的關(guān)鍵。保養(yǎng)良好的色譜柱應(yīng)具有很高的塔板數(shù),且儀器基線平
穩(wěn)。色譜柱比較嬌氣,在平時的工作中須注意以下事項(xiàng):
(1)色譜柱不能夠碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震蕩;安裝時,一定要保證閥件或管路的清潔。
(2)流動相在使用前必須進(jìn)行脫氣處理,盡量不使用或少使用高粘度的流動相。
(3)在滿足靈敏度的情況下,盡可能使用小進(jìn)樣量。如果樣品比較"臟",要進(jìn)行凈
化或提純處理。
(4)分析結(jié)束語后,要清洗掉進(jìn)樣閥中殘留的樣品,并用流動相或適當(dāng)?shù)娜軇┣逑瓷V柱。
(5)如色譜柱長期不用,應(yīng)該用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑保存并封閉或定期給柱子補(bǔ)充合適的流動相。
1.3 檢測器 
      對于紫外檢測器,在分析柱平衡的差不多時,開啟檢測器;在分析完成后,馬上關(guān)閉
檢測器。
1.4
2、 進(jìn)樣器 
      分析結(jié)束后,應(yīng)反復(fù)沖洗進(jìn)樣口,防止樣品的交叉污染或堵塞。常見故障的分析與排除
既使日常精心維護(hù)的液相色譜儀,隨著使用時間的增加或使用者經(jīng)驗(yàn)不足也會出現(xiàn)一
些問題或故障。現(xiàn)將液相色譜儀容易出現(xiàn)的故障及解決辦法介紹如下:
2.1
      保留時間變化
      保留時間的變化有三中情況:波動、縮短、延長。 
      保留時間出現(xiàn)波動時,應(yīng)檢查柱溫是否處于恒溫狀態(tài),如果設(shè)置為室溫,氣溫的變化 
      會引起保留時間的波動,應(yīng)該設(shè)置為恒定溫度;等度和梯度間還沒有充分達(dá)到平衡狀態(tài)時, 應(yīng)該用十倍以上柱體積的流動相去平衡色譜柱;緩沖液濃度太低時,應(yīng)換用>25mmol/L 的緩沖液;色譜柱被污染或已經(jīng)接近柱壽命時,應(yīng)更換保護(hù)柱或換新色譜柱。
      保留時間縮短時,流速增加,應(yīng)檢查流速的設(shè)定;柱溫高時,應(yīng)檢查柱的設(shè)置;進(jìn)樣量太大時,減少樣品用量或降低樣品濃度;流動相的組成發(fā)生了改變,比如流動相中易揮發(fā)有機(jī)相蒸發(fā),兩相之間互溶不好,會導(dǎo)致流動相不均勻或某一相出現(xiàn)部分沉淀;流動相的 PH 值應(yīng)保持 3~7.5 范圍內(nèi),否則會引起柱鍵合相的流失。
保留時間延長時,流速減小,應(yīng)檢查流速的設(shè)定和管路是否有泄露;柱溫低時,檢查
柱溫的設(shè)置;流動相的組成發(fā)生了改變,比如流動相中易揮發(fā)有機(jī)相蒸發(fā),兩相之間互溶不好,會導(dǎo)致流動相不均勻或某一相出現(xiàn)部分沉淀;檢查流動相的 pH 值是否 3~7.5 范圍內(nèi),否則會引起柱鍵合相的流失。
2.2 峰拖尾
      色譜柱超載時,要減少進(jìn)樣量或稀釋樣品或使用高溶量的色譜柱;色譜柱性能不佳時,更換色譜柱;死體積或柱外體積過大時,將連接降至zui低,并對所有連接點(diǎn)作合理的調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接;加入硅羥基,其作用是純化色譜柱,增加緩沖液的濃度,降低流動相的 pH 值,純化樣品;出現(xiàn)峰干擾時,應(yīng)清潔樣品,調(diào)整流動相。
2.3 峰展寬
      進(jìn)樣體積過大時,用流動相配樣;樣品過載時,進(jìn)小濃度、小體積樣品;在進(jìn)樣閥中
造成峰擴(kuò)展時,進(jìn)樣前后排出氣泡,以降低擴(kuò)散;流動相粘度過高時,提高柱溫,并采用低粘度流動相;等度洗脫,保留時間過長時,要增加流速或改用梯度洗脫;柱外體積過大時,[1] 將連接管徑和連結(jié)管降至zui小 。
2.4基線噪聲 
      流動相或檢測器中有氣泡時,要對流動相進(jìn)行脫氣處理;檢測器燈有連續(xù)噪聲時,更換氘燈;出現(xiàn)由污染引起的隨機(jī)噪聲時,應(yīng)清洗色譜柱、凈化樣品、使用 HIPLC 級試劑;偶然有噪聲時,可能是來自電源的干擾,如果電壓不穩(wěn)時,應(yīng)采用穩(wěn)壓電源。
2.5肩峰或分叉
      進(jìn)樣量太大或樣品濃度過高時,要減少進(jìn)樣量或稀釋樣品;樣品溶劑太強(qiáng)時,應(yīng)使用軟弱的樣品溶劑;色譜柱性能欠佳時,應(yīng)更換色譜柱。
2.6鬼峰
      色譜柱未達(dá)到平衡時,要繼續(xù)平衡色譜柱;樣品中溶劑出峰時,使用流動相作樣品的溶劑;出現(xiàn)進(jìn)樣閥殘余峰時,使用強(qiáng)溶劑清洗進(jìn)樣閥,并改進(jìn)閥和樣品的清洗程序;流動相用水不合格率,應(yīng)使用 HPLC 級的水。
3、使用注意事項(xiàng)
     在使用混合溶劑作流動相時,一定要先混合,再過 0.45um 濾膜;等流動相恢復(fù)至室溫,用超聲波或 He 氣進(jìn)行脫氣處理后,方可使用。 
     更換流動相時,必須按一定的程序進(jìn)行,否則會產(chǎn)生問題。更換流動相有三種情況:互溶性流動相的更換、無互溶性流動相的更換和緩沖溶液的更換。對于*種情況,先用準(zhǔn)備更換的流動相把吸濾器*清洗干凈,再打開儀器的排液閥,按清洗鍵,清洗泵中的流動相。
      將吸濾器放入新流動腥中,減慢流速清洗數(shù)分鐘后關(guān)閉排液閥。接下來清洗色譜柱和檢測器檢測池直到基線平穩(wěn)。對于第二種情況,先用與新舊流動相都互溶的中間清洗液(如:異丙醇)清洗,再用新流動相清洗,具體過程與*種情況相同。對于第三情況,應(yīng)先用蒸餾水作為中間清洗液進(jìn)行清洗,再用新流動相清洗即可。 
 

                       

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